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怎么看懂液相色譜圖 高效液相色譜圖解讀

云知道

概述：液相色譜法是一種以液體為流動(dòng)相的柱色譜分離與分析技術(shù)，于20世紀(jì)70年代建立起來的 。相對(duì)于以氣體為流動(dòng)相的氣相色譜而言，以液體為流動(dòng)相的任何一種色譜過程均稱為液相色譜 。由于液相色譜法高效、快速，之后得到迅速的發(fā)展，在經(jīng)典的液相色譜法的基礎(chǔ)上，吸收了氣相色譜法的理論和實(shí)踐技術(shù)，并采用高壓輸液泵、高效固定相和高靈敏度檢測(cè)器等裝置，實(shí)現(xiàn)了分析速度快、分離效率高和操作自動(dòng)化，這種柱色譜技術(shù)成為高效液相色譜法，又稱為高壓液相色譜法 。
高效液相色譜儀
流動(dòng)相的差異決定了液相色譜儀和氣相色譜儀的不同 。高效液相色譜儀包括高壓輸液泵、梯度淋洗裝置、進(jìn)樣裝置、色譜柱、檢測(cè)器和記錄系統(tǒng)等主要部件，其工作流程：貯液器中儲(chǔ)存的流動(dòng)相經(jīng)高壓泵送到色譜柱沖洗柱子，當(dāng)柱子平衡而且基線平穩(wěn)后，試樣通過注射器進(jìn)入進(jìn)樣器，然后由流動(dòng)相把試樣送到色譜柱中進(jìn)行分離，分離后的組分由檢測(cè)器檢測(cè)，輸出的信號(hào)通過放大器放大后用記錄儀記錄下來 。

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高壓輸液泵
用來輸送流動(dòng)相，應(yīng)具備流量穩(wěn)定而而且無脈動(dòng)，并有較大的調(diào)節(jié)范圍，因?yàn)榱髁坎粌H影響柱效能，還直接影響峰面積的重現(xiàn)性和保留值的準(zhǔn)確性等，且流動(dòng)相的壓力平衡可使檢測(cè)器噪聲降低 。此外還應(yīng)具備有較高的輸出壓力、能抗化學(xué)腐蝕、泵的死體積要小、操作與檢修方便等條件 。
梯度淋洗裝置
對(duì)于復(fù)雜樣品，組分的k（容量因子）值范圍很寬，采用等度洗脫時(shí)往往不能滿足要求，可采用梯度洗脫，即在分離過程中，組成流動(dòng)相的是兩種或兩種以上的不同溶劑，按一定程序連續(xù)改變配比、極性、PH值和離子強(qiáng)度，從而達(dá)到提高分離效果和分析速度的目的，梯度洗脫技術(shù)類似于氣相色譜中的程序升溫技術(shù) 。
進(jìn)樣裝置
進(jìn)樣裝置的作用是把分析樣品有效地送入色譜柱中進(jìn)行分離 。由于高效液相色譜柱子較短，固定相顆粒較細(xì)，進(jìn)入柱中的樣品在流動(dòng)相中擴(kuò)散越迅速，則色譜峰就越寬，因此，進(jìn)樣時(shí)要求樣品在到達(dá)柱頭前，不與流動(dòng)相混合，直接注射到柱頭中心即所謂“點(diǎn)進(jìn)樣” 。進(jìn)樣方式通常有：隔膜進(jìn)樣、停留進(jìn)樣、閥進(jìn)樣和自動(dòng)進(jìn)樣等 。
色譜柱
色譜柱是色譜分離的核心部分，分離效果的好壞主要決定于色譜柱的性能 。通常采用填充柱，即按一定的方法把固定相填入柱中，色譜柱由色譜柱管和填充的固定相組成，固定相是色譜分離的關(guān)鍵部分 。對(duì)色譜柱管的要求是耐高壓、耐腐蝕 。一般采用厚壁的玻璃管或內(nèi)壁經(jīng)過拋光的不銹鋼管制成，常用的柱內(nèi)徑為1~6nm，柱長(zhǎng)10~30cm，柱子的形狀為直形柱，柱子的尺寸及形狀的選擇要考慮填充的難易和柱效的高低 。
檢測(cè)器
高效液相色譜對(duì)檢測(cè)器的要求是靈敏度高、重現(xiàn)性好、線性范圍寬、噪聲低、定量準(zhǔn)確、對(duì)溫度和流量的變化不敏感等，衡量檢測(cè)器性能的一些標(biāo)準(zhǔn)一般仍沿用氣相色譜檢測(cè)器的表示方法 。高效液相色譜的檢測(cè)器一般分為兩類：一類是通用型檢測(cè)器（即總體性檢測(cè)器），它對(duì)試樣和流動(dòng)相總的物理或化學(xué)性質(zhì)有響應(yīng)，屬于這類檢測(cè)器的有示差折光檢測(cè)器和電導(dǎo)檢測(cè)器 。這類檢測(cè)器使用范圍廣，但是由于它對(duì)溶劑（流動(dòng)相）也有響應(yīng)，因此易受溫度、流量變化的影響，造成較大的噪聲和漂移，不能用于梯度淋洗，靈敏度較低，不適合痕量分析 。另一類是選擇性檢測(cè)器（溶質(zhì)性檢測(cè)器），它僅對(duì)被分離組分的物理或化學(xué)特性有響應(yīng)，對(duì)流動(dòng)相無響應(yīng)或響應(yīng)很小，如紫外吸收檢測(cè)器和熒光檢測(cè)器等都屬于這一類 。該類檢測(cè)器靈敏度高，受外界影響小，可用于梯度淋洗，但應(yīng)用范圍受到限制 。

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