RNA抽取一般使用Trizol法抽提:
Trizol是一種總RNA抽提試劑，內(nèi)含異硫氰酸胍等物質(zhì)，能迅速裂解細(xì)胞，抑制細(xì)胞釋放出的核酸酶活性 。目前常用Trizol法進(jìn)行提取組織或細(xì)胞中的RNA 。
【RNA提取原理】Trizol作用原理:
在勻質(zhì)化或溶解樣品中，Trizol試劑可保持RNA的完整性，同時(shí)能破壞細(xì)胞及溶解細(xì)胞成分 。加入氯仿離心后，裂解液分層成水相和有機(jī)相 。RNA存在于水相中 。
水相轉(zhuǎn)移后，RNA通過異丙醇沉淀回收 。移去水相后，用乙醇可從中間相沉淀得到DNA，加入異丙醇沉淀可從有機(jī)相得到蛋白質(zhì) 。
抽提RNA的使用目的
RNA用于不同的后續(xù)實(shí)驗(yàn)，其質(zhì)量要求不盡相同 。
cDNA文庫構(gòu)建要求RNA完整而無酶反應(yīng)抑制物殘留；
Northern對(duì)RNA完整性要求較高，對(duì)酶反應(yīng)抑制物殘留要求較低；
RT-PCR對(duì)RNA完整性要求不太高，但對(duì)酶反應(yīng)抑制物殘留要求嚴(yán)格 。因此 ， 明確實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖沁M(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)的首要條件 。
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