【請(qǐng)教梯度PCR設(shè)置梯度問題】梯度PCR是為第一次使用某條引物，為了摸索最佳退火條件設(shè)定，拿到引物時(shí)，會(huì)得到建議的Tm值，由于兩條引物不同，可算出一個(gè)退火溫度，但這個(gè)退火溫度不一定是最佳反應(yīng)條件，因此可以設(shè)定退火的梯度，最常用的為10℃，這樣每一個(gè)反應(yīng)都有一個(gè)退火溫度，最后電泳時(shí)，可以觀察到在哪一個(gè)退火溫度下，PCR產(chǎn)物產(chǎn)量和特異性都有保證，這樣后面就可以選這個(gè)溫度進(jìn)行試驗(yàn)，但是對(duì)于已經(jīng)有最佳條件的引物，或反應(yīng)體系，不需要做梯度PCR 。
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