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核酸檢測流程

小知識

【核酸檢測流程】核酸檢測常規(guī)的樣本類型包括咽拭子、鼻拭子、痰液、支氣管灌洗液、肺泡灌版洗液等 ， 權(quán)過程如下：
獲得患者樣本后 ， 需盡快進(jìn)行檢測 ， 如無法立即檢測需要轉(zhuǎn)運的樣本 ， 應(yīng)按照說明書的要求進(jìn)行低溫封裝 ， 并送到專門的檢測機構(gòu)進(jìn)行檢測 。 檢測機構(gòu)收到樣本后 ， 對樣本進(jìn)行核酸提取 ， 核酸提取試劑應(yīng)使用批準(zhǔn)產(chǎn)品說明書中指定的核酸提取試劑盒 。
病毒RNA需要首先逆轉(zhuǎn)錄為cDNA ， 再進(jìn)行擴(kuò)增檢測 。 PCR擴(kuò)增和檢測應(yīng)使用批準(zhǔn)產(chǎn)品說明書中指定的熒光定量PCR儀 ， 通過熒光定量PCR所得到的樣本Ct值的大小 ， 可以判斷患者樣本中是否含有新型冠狀病毒 。

核酸檢測流程


擴(kuò)展資料：
目前 ， 臨床上核酸檢測主要是通過咽拭子檢測方法 ， 流程是先囑被檢查者用淡鹽水漱口 ， 可以將口腔中的雜菌清理掉 ， 然后將標(biāo)簽貼于標(biāo)本容器上 。
告知被檢查者取咽拭子培養(yǎng)的目的和方法 ， 點燃酒精燈 ， 囑咐被檢查者張口的 ， 發(fā)啊的音 ， 充分暴露咽喉部 ， 用培養(yǎng)管內(nèi)的消毒長棉簽以靈敏而輕柔的動作擦拭兩側(cè)腭弓和咽扁桃體上的分泌物 ， 取樣完畢后 ， 將試管口在酒精燈火焰上進(jìn)行消毒 ， 然后將棉簽插入試管 ， 塞緊后及時送檢 。
核酸檢測作為病原診斷的一個重要依據(jù) ， 是目前確診的最重要依據(jù) ， 比如對于目前新冠肺炎的檢測 ， 病毒核酸檢測仍是確診的金標(biāo)準(zhǔn) 。
1、核酸提取使用硅膠柱離心、磁性硅膠顆粒分離方法以及自動化儀器等商品化試劑或設(shè)備并按說明書操作 。 提取RNA時應(yīng)注意防止RNA降解 。 DNA應(yīng)置于-20℃保存 ， RNA和需長期保存的DNA應(yīng)置于-80℃保存 。
2、逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA 。 逆轉(zhuǎn)錄cDNA合成反應(yīng)需使用逆轉(zhuǎn)錄引物、dNTPs、逆轉(zhuǎn)錄酶、RNA酶抑制劑、DTT、緩沖液和適量無RNA/DNA酶的超純水以及RNA模板 。 在擴(kuò)增儀或水浴箱中 ， 在規(guī)定的溫度和時間下進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng) 。
3、PCR擴(kuò)增反應(yīng)PCR反應(yīng)需使用引物、dNTPs、DNA聚合酶、緩沖液、和適量無RNA/DNA酶超純水、以及模板 。 在擴(kuò)增儀中 ， 按照設(shè)定的程序進(jìn)行擴(kuò)增 。 使用二次擴(kuò)增的套式PCR擴(kuò)增方法 。
4、擴(kuò)增產(chǎn)物定性分析；擴(kuò)增產(chǎn)物常用分析方法是瓊脂糖凝膠電泳法 ， 與分子量標(biāo)準(zhǔn)比較 ， 判斷擴(kuò)增片段是否在預(yù)期的分子量范圍內(nèi) 。 其它擴(kuò)增產(chǎn)物分析方法還有限制性內(nèi)切酶酶切分析、特異性探針雜交分析以及DNA序列分析等 。
5、結(jié)果判定和完成報告單：每一次檢測需同時做兩個陽性對照、兩個陰性對照 ， 只有陽性對照擴(kuò)增出預(yù)期的片段、陰性對照沒有擴(kuò)增出任何片段、雙份平行樣品結(jié)果一致的情況下實驗才成立 ， 可以作出核酸陽性或陰性反應(yīng)結(jié)果的判定 。

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