非洲豬瘟病毒，根據(jù)其致病力的不同，可分為高致病性、中等致病性和低致病性三類 。高致病性毒株能造成嚴(yán)重的急性病癥，并在感染后4-15天達(dá)到90-100%的死亡率;中等毒性的毒株死亡率在30-70%;低致病性毒株的死亡率在10-30% 。
中低等級(jí)感染后存活下來(lái)的豬只是否長(zhǎng)期帶豬并向外界排毒，這是長(zhǎng)期爭(zhēng)論的焦點(diǎn) 。德國(guó)弗里德里希·勒夫勒研究院診斷病毒所的研究人員贈(zèng)出了自己的實(shí)驗(yàn)結(jié)論 。
一
實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
實(shí)驗(yàn)中，研究人員選取了36頭非瘟病毒檢測(cè)陰性、非瘟抗體檢測(cè)陰性的5-6月豬，其中30頭作為攻毒豬，用分離于荷蘭的中等毒性的 Netherlands’86 毒株通過(guò)病毒培育上清液滴鼻的方式進(jìn)行接種感染，稱為C型豬 。C型豬隨機(jī)分為三組，每組10頭，分辭關(guān)在一個(gè)豬舍三個(gè)孤立的大欄中 。
剩余6頭不接種病毒，用于在C型豬感染后期與其同欄飼養(yǎng)，檢測(cè)感染后期C型豬的感染能力，稱為S型豬 。
感染后，C型豬每天檢測(cè)直腸溫度并察看臨床現(xiàn)象 。要是溫度兩天以上達(dá)到40度，則確以為發(fā)燒 。臨床觀測(cè)癥狀包括：活躍度、耐受度、呼吸頻率、步態(tài)、皮膚、眼睛、臉頰和采食量等，并建立評(píng)分系統(tǒng) 。
為寥繢判感染后豬只病毒血癥、排毒和免疫應(yīng)答的程度，在感染第3，7，10，14，20，29，42，48，63和91天抽取前腔靜脈血進(jìn)行化驗(yàn) 。
同一光陰，為了檢測(cè)感染豬只排毒情況，用棉簽拭子收集包括糞便樣品、唾液和口咽部樣品在內(nèi)的拭子樣品，用作qPCR檢測(cè) 。從105天到126天，拭子樣品每周收集一次 。
99天后，幸存的19頭C型豬與6頭S型豬混養(yǎng)，每組放2頭S型豬，并按原本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)收集各類檢測(cè)樣品 。164/165天后，所有存活的C型豬和S型豬解剖采集組織樣品檢測(cè)，包括：扁桃體、唾液腺、脾臟、肺臟和下頜淋巴結(jié)，和腹股溝、肝、腎、腸胃、肺等多處淋巴結(jié) 。
所有拭子樣品、血液樣品和組織樣品中病毒的都要用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)，抗體用ELISA檢測(cè) 。為了檢測(cè)血液和組織中有活性的病毒，應(yīng)用血細(xì)胞吸附實(shí)驗(yàn)檢測(cè) 。
二
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
1
臨床癥狀
中等毒性的 Netherlands’86毒株感染后的C型豬表現(xiàn)出多種不同臨床癥狀，包括急性致死、延遲致死、慢性病癥，和最終恢重等 。
多數(shù)豬只在感染4-6天，浮現(xiàn)發(fā)燒癥狀 。在急性死亡的豬只身上，臨床癥狀表現(xiàn)為萎靡不振、結(jié)膜炎、不采食、便秘、皮膚變紅，尤其在耳朵和眼睛區(qū)域;發(fā)燒41.8℃，一些豬在高燒5天后浮現(xiàn)中樞神經(jīng)障礙癥狀 。急性癥狀均勻持續(xù)8-10天 。該階段死亡的豬，解剖發(fā)明多個(gè)臟器出血：外周淋巴結(jié)腫脹和出血，腎臟出血點(diǎn)和肺部水腫 。
2
病毒檢測(cè)
所有30頭C型豬在滴鼻感染一段光陰后，抽血做qPCR檢測(cè)都檢出陽(yáng)性，首席次檢測(cè)出陽(yáng)性的光陰在感染后3-21天之間 。在第10和14天，血液中病毒含量最大 。在感染第42天，6頭C型豬首席次qPCR檢測(cè)結(jié)果呈陰性，第48天7頭，第63天10頭結(jié)果陰性 。到了第91天，盡管52%的C型豬依然陽(yáng)性，但病毒載量降低了(Cq 28-30) 。
同光陰的30頭C型豬血樣HAT檢測(cè)(HAT檢測(cè)陽(yáng)性說(shuō)明ASFV有感染活性)發(fā)明，血清HAT檢測(cè)結(jié)果與血液PCR結(jié)果一致，大多數(shù)HAT檢測(cè)陽(yáng)性結(jié)果浮現(xiàn)在14天感染 。有趣的是，HAT首席例陰性結(jié)果浮現(xiàn)在29天，隨后大量存活的C型豬浮現(xiàn)HAT陰性，到了第63天所有存活的C型豬檢測(cè)陰性 。這約摸表明存活的非瘟感染豬喪失感染能力要早于核酸檢測(cè)陰性結(jié)果浮現(xiàn) 。
棉簽拭子采樣檢測(cè)結(jié)果顯示感染ASFV的C型豬排毒情況 ?？谇皇米訕悠穛PCR檢測(cè)在感染第3天浮現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果(兩頭豬) 。在第7和10天，絕大多數(shù)的口腔拭子樣蒲獪現(xiàn)陽(yáng)性(Cq在30-41間) 。從第14天開(kāi)始，陽(yáng)性拭子樣品數(shù)量開(kāi)始減少，到第21和29天，惟獨(dú)1個(gè)樣蒲崾現(xiàn)陽(yáng)性，到了第42天，所有的口腔拭子樣蒲崾現(xiàn)陰性 。唾液樣品與口腔拭子結(jié)果一致，在7-10天浮現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果高峰，在14天開(kāi)始減少 。不同的是，唾液樣品病毒載量更多，持續(xù)光陰更長(zhǎng) 。糞便樣品中的病毒含量更低，最后的陽(yáng)性樣浮現(xiàn)在第29天 。
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