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薄層層析 薄層層析裝置圖


薄層層析 薄層層析裝置圖

1.TLC概述
◆定義:將固定相與支持物制作成薄板或薄片,流動相流經(jīng)該薄層固定相而將樣品分離的層析系統(tǒng)
◆原理:色譜法的基本原理是利用混合物中各組分在某一物質(zhì)中的吸附或溶解性能的不同,或和其它親和作用性能的差異,使混合物的溶液流經(jīng)該種物質(zhì) , 進行反復(fù)的吸附或分配等作用 , 從而將各組份分開 。
◆特點:樣品用量少(微克~毫克級),分析快速
◆分類:按所用固定相材料不同,分為吸附、分配、離子交換、凝膠過濾等薄層層析 。我們常用的硅膠,氧化鋁層屬于吸附色譜 。
圖 1
2.點樣一成功分離的關(guān)鍵
a.點樣原點小而圓,直徑盡量不受超過2mm
b.在便于顯色的前提下,點樣量盡量少 , 防止過載施尾或掩蓋Rf相近的點
C.點樣勿傷及薄層表面
d.點樣原點盡量遠(yuǎn)離薄層邊緣,至少相隔3mm , 減少邊緣效應(yīng)
e.選擇規(guī)則的矩形薄板;
f.所有點樣點要保持在一條與底邊平行的直線上,務(wù)必點交又點
g.點樣完后,溶劑用電吹風(fēng)盡量吹千

圖 2
3.展開技巧
a.盡量用新配制展開劑
b.展開劑用量適中 , 不能漫過點樣原點
c.展開缸蓋的密封性要好;
d.薄層板側(cè)邊不能貼到展開缸壁;
e.理想的展開位置為保證Rf值在0.2-0.8之內(nèi)
f.薄層板盡量用鑷子夾住小心放入展開缸中.,而不是用手捏住放入

圖 3
◆看板注意這幾點:一看、二照、三碘、四顯
a.用攝子小心取出薄層板,吹千溶劑荊;
b.首先在目光下觀察,劃出有色物質(zhì)的斑點位置;
c.在紫外燈下觀察有無暗斑或熒光斑點
d.大部分有機物會吸附碘,可逆的產(chǎn)生棕色或黃色斑點;e既無色又無紫外吸收的物質(zhì),可以用顯色劑顯色f千萬注意,等高的點 , 不一定是同一個物質(zhì)
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