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bradford原理，bradford法原理？

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bradford原理

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bradford法原理?
bradford法原理?
bradford法測(cè)定蛋白質(zhì)含量的原理是考馬斯亮藍(lán)G250與蛋白質(zhì)結(jié)合可以顯色，用分光光度計(jì)在吸光度595nm處讀數(shù)，通過標(biāo)準(zhǔn)蛋白與G250結(jié)合顯色建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，再加待測(cè)蛋白與G250結(jié)合顯色后讀數(shù)代入標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定蛋白質(zhì)含量 。
不利因素主要是特殊蛋白的結(jié)構(gòu)，緩沖液組分中有干擾試劑等 。
雙縮脲法和Folin—酚試劑法的明顯缺點(diǎn)和許多限制，促使科學(xué)家們?nèi)ふ腋玫牡?。取6支試管分別標(biāo)號(hào)，前5支試管分別加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液，最后一支試管加待測(cè)蛋白質(zhì)溶液，不加標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液，每支試管液體總量通過加入蒸餾水補(bǔ)足而保持一致 。
考馬斯亮藍(lán)染色法?
考馬斯亮藍(lán)染色法，也稱Bradford檢測(cè)法，是目前靈敏度最高的蛋白質(zhì)測(cè)定方法 。其最早是在1976年由Bradford根據(jù)蛋白質(zhì)與染料相結(jié)合的原理建立 。
Bradford法原理
在酸性分析試劑溶液中，染料考馬斯亮藍(lán) G-250與蛋白質(zhì)結(jié)合的主要是陰離子形式的藍(lán)色，其最大吸收峰 (λmax)位置在590nm，形成的復(fù)合物顏色的深淺與蛋白濃度的高低成正比關(guān)系 。因此，通過測(cè)定染料的藍(lán)色離子態(tài)可以定量測(cè)定蛋白質(zhì)，通常測(cè)定595nm下的吸光度 。
研究認(rèn)為染料最容易與蛋白質(zhì)中的精氨酰和賴氨酰殘基結(jié)合，由于各種蛋白質(zhì)中的含量不同，與染料的相互作用有強(qiáng)有弱，導(dǎo)致測(cè)定不同蛋白質(zhì)時(shí)偏差較大 。進(jìn)行了一些改良后，可以克服波動(dòng)問題，但通常會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)更容易受其他化合物的干擾 。
蛋白質(zhì)的檢測(cè)最早起源于?
雖然很早之前，諸如“給牲畜喂養(yǎng)奶酪加工分離出的蛋白粉，能讓牲畜更為強(qiáng)壯，后來人也開始出這個(gè)”這事兒出現(xiàn)得很早，甚至可以追溯到古希臘，但這不能算人發(fā)現(xiàn)了蛋白質(zhì)，他們沒有能理解“為什么” 。
所以從近代化學(xué)對(duì)物質(zhì)描述的規(guī)范上來說，最早的是法國的安東尼奧.弗朗索瓦，他發(fā)現(xiàn)酸處理一類物質(zhì)分子時(shí)會(huì)令其凝結(jié)凝絮(實(shí)際上是蛋白質(zhì)變性)，這些物質(zhì)來自蛋清，血液，小麥面筋等……當(dāng)然，他只是發(fā)現(xiàn)了這個(gè)現(xiàn)象，并沒有對(duì)蛋白質(zhì)做出明確定義 。
之后蛋白質(zhì)作為定義被提出，那就是1838年的瑞典化學(xué)家永斯.貝采利烏斯了 。同期荷蘭的化學(xué)家赫拉爾杜斯.馬爾德則發(fā)現(xiàn)了所有蛋白質(zhì)都含有氮，并且鑒定出了蛋白質(zhì)的降解產(chǎn)物之一---亮氨酸(氨基酸中的一種)
檢驗(yàn)蛋白質(zhì)的方法是雙縮脲試劑，但這玩意最初發(fā)明不是為了檢測(cè)蛋白質(zhì)，是尿素(他脫水縮合后的東西可以令雙縮脲試劑變色，后來人們發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)和這玩意居然有類似結(jié)構(gòu)，然后雙縮脲就變成檢驗(yàn)蛋白質(zhì)的玩意了 。) 。
但是實(shí)際上后來檢驗(yàn)蛋白質(zhì)有其他方法，譬如檢驗(yàn)游離氨基，羧基(必須連a碳)的茚三酮反應(yīng)，檢驗(yàn)肽鍵(對(duì)酚基也有作用)的Folin酚試劑，與蛋白質(zhì)以范德華力結(jié)合生色的考馬斯亮藍(lán)反應(yīng)等 。不同方法是怎么發(fā)現(xiàn)的那就啰嗦了，這里就不展開了 。

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