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鏈終止法原理


鏈終止法原理



【鏈終止法原理】通過合成與單鏈DNA互補(bǔ)的多核苷酸鏈,由于合成的互補(bǔ)鏈可在不同位置隨機(jī)終止反應(yīng),產(chǎn)生只差一個(gè)核苷酸的DNA分子,從而來讀取待測(cè)DNA分子的順序 。核酸模板在核酸聚合酶、引物、四種單脫氧堿基存在條件下復(fù)制或轉(zhuǎn)錄時(shí),如果在四管反應(yīng)系統(tǒng)中分別按比例引入四種雙脫氧堿基,只要雙脫氧堿基摻入鏈端,該鏈就停止延長,鏈端摻入單脫氧堿基的片段可繼續(xù)延長,如此每管反應(yīng)體系中便合成以共同引物為5端,以雙脫氧堿基為3端的一系列長度不等的核酸片段 。反應(yīng)終止后,分四個(gè)泳道進(jìn)行電泳 。以分離長短不一的核酸片段,根據(jù)片段3端的雙脫氧堿

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