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(2) 遞送方法的選擇：迄今為止，已經(jīng)成功地實(shí)施了多種用于體內(nèi)穩(wěn)定同位素示蹤劑遞送的方法，包括通過飲食或通過管飼法口服遞送，或通過靜脈內(nèi)輸注或腹膜內(nèi)注射直接引入循環(huán)中。具體方法應(yīng)由根據(jù)具體關(guān)注的生物學(xué)問題進(jìn)行選擇。無論選擇哪種方法，都必須注意在示蹤劑管理和進(jìn)一步采樣期間對(duì)實(shí)驗(yàn)條件的控制和標(biāo)準(zhǔn)化，以便能夠從示蹤劑實(shí)驗(yàn)中提取出可重復(fù)且生物學(xué)上合理的結(jié)論。

輸注是體內(nèi)測(cè)定中示蹤劑給藥的運(yùn)用最廣泛的方法。在規(guī)定的時(shí)間段內(nèi)以恒定速率向血液中施用示蹤劑，然后評(píng)估示蹤劑進(jìn)入下游組織代謝產(chǎn)物，可以最大程度地減少與養(yǎng)分管理高峰相關(guān)的劇烈瞬態(tài)效應(yīng) 。但是輸注具有增加的侵襲性和技術(shù)復(fù)雜性以及成本高的缺點(diǎn)（成本高通常是因?yàn)樾枰罅康氖聚檮⑶以谘芯匡嬍炒x產(chǎn)物時(shí)可能不是最佳的。
(3) 代謝通量分析（即MFA）：在標(biāo)準(zhǔn)的同位素固定MFA中，將細(xì)胞內(nèi)代謝物的穩(wěn)態(tài)標(biāo)記模式與細(xì)胞外營(yíng)養(yǎng)攝取或分泌和細(xì)胞生長(zhǎng)的測(cè)量值結(jié)合起來，并整合到由于細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞外代謝通量而引起的原子轉(zhuǎn)移的數(shù)學(xué)模型中。然后，在吸收、分泌和生物量生長(zhǎng)速率所施加的約束下，執(zhí)行計(jì)算迭代過程以估算最適合所測(cè)標(biāo)記模式的通量值。

【新型的代謝組學(xué)技術(shù) 臨床代謝組學(xué)】在體內(nèi)應(yīng)用MFA會(huì)帶來一些障礙，主要問題是體內(nèi)吸收和分泌速率的確定，通過循環(huán)不同器官之間的代謝物交換使該過程變得復(fù)雜。此外，鑒于體內(nèi)示蹤劑實(shí)驗(yàn)的持續(xù)時(shí)間通常很短，根據(jù)同位素固定MFA的要求，組織內(nèi)不一定總能達(dá)到穩(wěn)態(tài)標(biāo)記，而動(dòng)態(tài)體內(nèi)測(cè)量通常僅對(duì)血樣可行，這限制了INST-MFA的適用性。
5. 當(dāng)前代謝流研究遇到的問題及解決方法
遇到的問題主要包括：組織異質(zhì)性，真核生物代謝的區(qū)室特征，以及未建立單細(xì)胞和單細(xì)胞器代謝組學(xué)方法。
解決方法主要的有：
(1) 在代謝猝滅和代謝物提取之前，使用熒光激活細(xì)胞分選術(shù)（即FACS）根據(jù)細(xì)胞類型特異性標(biāo)記物對(duì)異種細(xì)胞群體進(jìn)行預(yù)分選。
(2) 采用在全細(xì)胞中快速分離線粒體和溶酶體組分的方法來探測(cè)這些細(xì)胞器的代謝 ?；蛘呋诰€粒體的表位標(biāo)記以通過磁免疫沉淀進(jìn)一步分離。
(3) 質(zhì)譜成像（即MSI）空間代謝組學(xué)也許是應(yīng)用最廣泛的技術(shù)，具有在亞細(xì)胞（甚至亞細(xì)胞器）分辨率下表征代謝物水平和同位素標(biāo)記模式的能力。當(dāng)前基于MSI的方法是還需要在空間分辨率，代謝物覆蓋范圍和靈敏度之間進(jìn)行必要的權(quán)衡。但是，可以預(yù)期，MSI儀器的不斷改進(jìn)，以及更高效的電離方法和替代采樣方法的發(fā)展，將很快使單細(xì)胞示蹤劑分析和代謝組學(xué)在體內(nèi)代謝研究中成為常規(guī)應(yīng)用。
二、代謝流研究示例

1. 實(shí)驗(yàn)材料：
CRC（結(jié)直腸癌）組織樣本
正常組織樣本
2. 研究方法：
此研究通過質(zhì)譜和基于13C的代謝通量分析，確定谷氨酰胺依賴的三羧酸（TCA）循環(huán)回補(bǔ)是 SIRT5 調(diào)控大腸癌細(xì)胞的主要代謝途徑。還揭示了 SIRT5 對(duì) GLUD1 脫戊?；凸δ芗せ畹恼{(diào)節(jié)作用，表明 SIRT5 是大腸癌潛在的治療靶點(diǎn) 。
3. 研究結(jié)果：