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如何利用熒光顯微鏡檢測細(xì)胞凋亡原理 如何利用熒光顯微鏡檢測細(xì)胞凋亡

生活百科

1、收集約106細(xì)胞，用冷PBS洗2次 。
2、4%福爾馬林4℃固定10min左右后涂片，晾干 。
3、以5-10μg/mL hocchst 33258染色5-10min，水沖凈，晾干后觀察，以紫外光（340nm）激發(fā)hocchest 。
4、細(xì)胞凋亡是指為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，由基因控制的細(xì)胞自主的有序的死亡 。細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死不同，細(xì)胞凋亡不是一件被動的過程，而是主動過程，它涉及一系列基因的激活、表達(dá)以及調(diào)控等的作用，它并不是病理條件下，自體損傷的一種現(xiàn)象，而是為更好地適應(yīng)生存環(huán)境而主動爭取的一種死亡過程 。
【如何利用熒光顯微鏡檢測細(xì)胞凋亡原理 如何利用熒光顯微鏡檢測細(xì)胞凋亡】5、細(xì)胞凋亡有別于細(xì)胞壞死，它有一系列的細(xì)胞形態(tài)學(xué)和生物化學(xué)的改變，包括出現(xiàn)染色體濃縮、DNA降解、凋亡小體的形成等 。在正常的活細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸（phosphotidylserine,PS）位于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)，但在凋亡細(xì)胞中，PS從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面，暴露在細(xì)胞外環(huán)境中，Annexin-V（膜聯(lián)蛋白-V）是一種分子量為35-36KD的Ca2+的依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與PS高親和力結(jié)合 。因此將Annexin-V進(jìn)行熒光素（如FITC 、PE）或生物素（biotin）標(biāo)記，以標(biāo)記了的膜聯(lián)蛋白-V作為探針，利用熒光顯微鏡檢測細(xì)胞凋亡的發(fā)生 。

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